Effect of cellular folate availability on adipocyte life cycle and metabolism : Trabalho de Investigação : Efeito da disponibilidade celular de folatos no metabolismo e ciclo de vida de adipócitos

Abstract

Resumo da tese: O papel dos folatos na obesidade e na síndrome metabólica começa agora a ser estudado mas ainda está longe de ser compreendido. Vários estudos têm focado a sua atenção na associação dos níveis plasmáticos de folatos com os de homocisteína, um factor de risco independente para o desenvolvimento da doença cardiovascular. Mais recentemente, estudos epidemiológicos revelaram uma associação inversa entre os níveis plasmáticos de folatos com o índice de massa corporal. Contudo, não há evidências directas sobre os efeitos dos folatos no tecido adiposo. Assim, o presente trabalho teve como objectivo investigar o efeito da disponibilidade celular de folatos na proliferação dos pré-adipócitos e na captação de glicose e na adipogénese de adipócitos. Para tal, usou-se a linha celular de pré-adipócitos 3T3-L1 e avaliou-se a sua proliferação por coloração das proteínas da cultura com sulforrodamina B (SRB) e a incorporação de metil-timidina-3H após 24 h ou 48 h de tratamento com metotrexato (MTX, 0.1 and 10 uM), um indutor de baixos níveis celulares de folatos. A diferenciação foi induzida nos pré-adipócitos com um cocktail apropriado de diferenciação na presença ou ausência de MTX e a adipogénese foi determinada pela quantificação da acumulação lipídica após a coloração com oil red O. A captação de desoxiglicose-3H pelos adipócitos foi determinada por cintilometria líquida. O tratamento com metotrexato durante 24 h ou 48 h reduziu o conteúdo proteico da cultura celular e a incorporação de metil-timidina-3H de uma forma dependente do tempo e da concentração (P< 0,05).

Thesis abstract: The role of folate in obesity and metabolic syndrome has started to be investigated but is far from being fully understood. Many studies have drawn attention to the association of folate status and plasma homocysteine levels, an established independent risk factor for cardiovascular disease development. Recently, epidemiologic data shows an inverse association between serum folate and body mass index. However, there is no straight evidence about the effects of folate on adipose tissue. In this regard, the aim of this study was to investigate the effect of cellular folate availability on preadipocyte proliferation, and on adipocyte adipogenesis and glucose uptake. 3T3-L1 preadipocytes were cultured to evaluate proliferation by sulforhodamine B staining and methyl-3H-thymidine incorporation, after 24 h or 48 h of treatment with methotrexate (MTX, 0.1 and 10 uM), an inducer of a low cellular folate status. Preadipocytes were induced to differentiate with an appropriate adipogenic cocktail in the presence or absence of MTX, and adipogenesis was determined by measuring lipid accumulation after staining with oil red O. 3H-Deoxyglucose uptake was determined by liquid scintillation counting. MTX treatment for 24 h and 48 h reduced culture protein content and methyl-3H-thymidine incorporation in a time- and concentration-dependent manner (P< 0.05). At the end of treatment, there was even a lower protein content than in the beginning of treatment for the highest concentration of MTX (10 uM) used (P<0.05), revealing cytotoxicity.