Caracterização da y-tubulina 23C em Drosophila melanogaster

Abstract

O conhecimento dos mecanismos de segregação dos cromossomas reveste-se da maior importância no estudo da divisão celular. Entre os componentes moleculares envolvidos nesses processos encontra-se a g-tubulina, uma proteína pertencente à superfamília das tubulinas e implicada na nucleação, organização e estabilidade dos microtúbulos. O trabalho aqui presente consistiu na caracterização de um alelo mutante de gtub23C, um gene que codifica para uma isoforma de expressão zigótica da g-tubulina em Drosophila melanogaster. Este organismo foi utilizado como modelo de estudo, dado que permite fácil identificação e caracterização de alelos mutantes de genes envolvidos na divisão celular, muito particularmente na mitose. O alelo mutante caracterizado (*tub23CPI) deriva da linha mutante 141. O trabalho inicial de caracterização desta linha revelou a inserção de um elemento P na região "leader" de *tub23C, que condiciona a expressão do gene. Os neuroblastos de indivíduos homozigóticos 141 exibiem um severo fenótipo mitótico e uma organização aberrante do aparelho mitótico com destaque para a estrutura anormal dos centrossomas [Gomes, 1994; Sunkel et al., 1995]. A continuação do estudo deste mutante foi realizada no âmbito do presente projecto e pertendeu confirmar mediante testes genéticos e moleculares que a linha 141 era um alelo mutante de *tub23C. Os resultados mostraram a existência de outras mutações na linha original 141 com influência sobre o fenótipo mutante. O alelo mutante *tub23CPI foi isolado na linha recombinante 141bs. A análise de *tub23CPI revelou que este alelo é hipomórfico e semi-letal. O estudo citológico de neuroblastos e discos imaginais de indivíduos homozigóticos confirmou que a mutação em *tub23C causa severas alterações na organização do aparelho mitótico e na estrutura dos centrossomas. O exame da espermatogénese nos testículos dos machos *tub23CPI mostrou que a mutação origina a formação de fusos meióticos totalmente aberrantes e a degenerescênc ...