Factors influencing the development of cloned embryos

Abstract

A técnica de transferência nuclear consiste na introdução de um núcleo de uma célula dadora para um oócito previamente enucleado. Diferentes técnicas de transferência nuclear estão agora disponíveis, de forma a simplificar o processo e aumentar a sua eficiência. No entanto, no ratinho, os métodos ainda estão dependentes de equipamento muito dispendioso, requerem ainda grande experiência e conhecimento das técnicas de manipulação. Vários laboratórios ainda não obtiveram sucesso ao usar o método de Honolulu, tendo no entanto obtido sucesso quando usam métodos de fusão de células em outras espécies. A clonagem de ratinhos através da utilização de células somáticas diferenciadas está ainda longe de ser uma técnica de routina, apesar do primeiro animal já ter sido clonado em 1998. Muitos poucos laboratórios em todo mundo conseguiram repetidamente clonar animais saudáveis através da transferência directa de células somáticas adultas. Neste projecto, uma técnica de transferência nuclear em embriões "zona-free", previamente desenvolvida na espécie bovina, foi modificada e aplicada em ratinhos. Esta técnica incluí a remoção da zona pelúcida e a enucleação dos oócitos sem pipeta de sucção; a "colagem" da célula dadora ao citoplasto antes da aplicação dos pulsos eléctricos para a fusão e finalmente a cultura individual dos embriões reconstruídos em pequenas gotas para prevenir agregação. Por fim, foram testadas, algumas modificações e ajustes à técnica de forma a permitir a sua optimização e melhorar os resultados, no ratinho. O nascimento de um ratinho clonado e saudável usando esta técnica de transferencia nuclear em embriões "zona-free" é a prova de real de uma tecnologia que promete um aumento da eficiência e sua simplificação.Simultaneamente, outros estudos foram feitos em grupos de controlo de embriões com e sem zona pelúcida, provenientes de animais fertilizados. Estes embriões não mostraram diferenças significativas no desenvolvimento in vitro até a fase de blastocis ...