Contribuição da PCR na investigação médico-legal

Abstract

O principal objectivo deste estudo consistiu no desenvolvimento de metodologias de análise do DNA, em amostras biológicas, com aplicação na determinação da relação de parentesco entre indivíduos (casos de filiação) e casos de identificação genética humana.A descoberta da PCR para o estudo dos loci altamente polimórficos, designadamente loci VNTR e STR, constituiu uma inovação muito promissora em várias áreas da ciência e, em particular, na Medicina Legal, porquanto permitiu obviar as desvantagens relacionadas com o uso dos marcadores genéticos convencionais e com o estudo dos loci VNTR via RFLP.Os requisitos considerados mais importante para a escolha dos sistemas, consistiram no facto dos respectivos loci se localizarem em cromossomas diferentes ou, pelo menos, em braços distintos e as sequências que rodeavam a região de repetição serem conhecidas, a fim de ser possível a construção dos "primers". Para além de, relativamente aos loci VNTR, as unidades de repetição não serem demasiado pequenas ( 15 pb), para possibilitar a distinção dos alelos que diferiam numa unidade de repetição.Relativamente aos loci STR, que neste estudo foram amplificados dois a dois (duplex), foram eleitos aqueles em que não se verificasse sobreposição do tamanho dos respectivos alelos.Neste contexto, foram seleccionados três sistemas AMPFLP: D1S80 (Kasai e col., 1990); 3´ApoB (Boerwinkle e col., 1989); YNZ22 (Horn e col., 1989) e quatro loci STR: HUMVWA31A (Kimpton e col., 1992); HUMTH01 (Polymeropoulos e col., 1991a; Edwards e col., 1992); HUMFES/FPS (Polymeropoulos e col., 1991b); HUMF13A1 (Polymeropoulos e col., 1991c). Estes marcadores possuem elevado polimorfismo, proporcionando, por isso, um poder informativo apreciável, sendo relativamente fáceis de caracterizar.Em face do exposto, foi delineado um plano de trabalho que incluísse vários passos, designadamente:- Optimização das condições de amplificação, separação dos produtos amplificados e identificação dos alelos, o que e ...