Automatização do processo de extracção em fase sólida para a determinação de compostos fenólicos em alimentos

Abstract

O principal objectivo do trabalho apresentado na presente dissertação foi a implementação de um sistema “lab-on-valve” (LOV) associado ao conceito de “bead injection” aplicado à extracção em fase sólida de compostos fenólicos presentes em amostras alimentares, seguida pela quantificação através do método de Folin-Ciocalteu. Foi desenvolvido um ciclo analítico automático contendo as principais etapas do processo de extracção em fase sólida, incluindo neste caso também a formação da coluna de adsorvente OASISTM HLB num dos canais do dispositivo LOV. Foi efectuada a avaliação da retenção dos compostos na coluna utilizando o ácido gálhico como composto modelo. Neste caso foi avaliada a influência da composição da matriz da amostra e da solução transportadora usada na remoção da matriz. Também foi avaliada a eficiência da eluição recorrendo a distintos eluentes. A utilização de padrões acidificados com HCl 10 mM, o uso de água com transportador e a utilização da solução eluente composta por metanol 50% (v/v) + hidróxido de sódio 10 mM foram as condições escolhidas para posterior aplicação à amostras. O procedimento automático desenvolvido foi aplicado a outros compostos fenólicos (ácido cafeico, galhato de octilo, quercetina e ácido tânico), a um composto não-fenólico (ácido ascórbico), reactivo e quantificável pelo método de Folin-Ciocalteu, e a amostras de vinho tinto e sumo de laranja. Os resultados obtidos para os compostos testados evidenciaram a retenção selectiva dos compostos fenólicos e a não-retenção do ácido ascórbico, tendo sido possível estimar a contribuição dos compostos fenólicos na capacidade redutora das amostras através do método de Folin-Ciocalteu.

The main objective of the work presented in this dissertation was the development of a lab-on valve (LOV) system associating the bead injection concept for application to solid phase extraction of phenolic compounds in food samples, followed by their quantification using the Folin-Ciocalteu method. An analytical cycle comprising the main steps present on solid phase extraction protocols was implemented, including also the on-line formation of OASISTM HLB sorbent column inside one of the channels of LOV device. The retention of phenolic compounds on this sorbent was evaluated using gallic acid as model analyte under different sample matrix and carrier solution compositions. Elution efficiency was also assessed for different eluents. Application to samples was attained using standard solutions prepared in HCl 10 mM, water as carrier and methanol 50% (v/v) + sodium hydroxide 10 mM as eluent. The automatic protocol was applied to several phenolic compounds (caffeic acid, octylgallate, quercetin and tannic acid), to a non-phenolic compound (ascorbic acid), which reacts with and can be quantified by Folin-Ciocalteu method, and also to red wine and orange juice samples. Results obtained showed that phenolic compounds were retained selectively and ascorbic acid was not retained, which allowed the estimation of phenolics contribution to the Folin-Ciocalteu reducing index for antioxidant assessment.